增加到第四周的1，0680&nbp;±1218&nbp;（&nbp;p&nbp;<001），这表明pd-1&nbp;在我们模型中的d&nbp;中具有潜在作用。
在脾脏和骨髓中，随着肿瘤的发展，d的比例也显著增加，其模式与肿瘤组织和外周血中的d相同。此外，我们在tb小鼠中观察到明显的脾肿大，这与我们观察到的d在脾内聚集一致。
为了确定局部照射对肿瘤生长和d的影响，当肿瘤直径达到75&nbp;时，我们使用大分割rt(20&nbp;gy/f)治疗皮下肿瘤。放疗导致肿瘤进展延迟长达一周，在第7至第10天的最小体积约为500&nbp;3，但此后肿瘤开始再生。根据放疗前后肿瘤生长曲线，我们选择放疗后第3天为再生前生长，放疗后1周为肿瘤体积最小时为再生开始，放疗后2周和3周为再生阶段。肿瘤组织苏木精-伊红染色显示，与未治疗的肿瘤相比，放疗后的肿瘤中有更多的浸润性炎症细胞。随后的d11b特异性免疫组化染色显示，大多数炎症细胞是d11b+髓系细胞，这表明局部照射可能导致d的积累。为了证实我们的假设，我们在局部照射后的不同时间点对总d和这两个亚群进行了流式细胞术分析。局部照射后，放疗后肿瘤浸润d的比例比未治疗肿瘤高2倍(trv&nbp;rt=2133±329&nbp;v&nbp;4410±300，p<0001)。pn-d与总d具有相同的增加趋势(trv&nbp;rt=1637±247&nbp;v&nbp;3866±424，p<0001)，而-d比例保持在约01，且与肿瘤大小和治疗无关。外周血情况同肿瘤组织。
为了确定受照射肿瘤中pn-d&nbp;的逐渐积累是否有助于&nbp;肿瘤的再生长，或者这种积累是否仅仅是肿瘤生长的结果，使用抗y-6g&nbp;单克隆抗体来消耗d&nbp;抗y-6g抗体的应用显着降低了肿瘤部位和外周血中pn-d的频率（p<005）。此外，用抗&nbp;y-6g&nbp;抗体治疗大大延迟了照射后的再生，这表明pn-d的募集对肿瘤再生至关重要。
虽然pn-d利用一系列机制来抑制抗肿瘤免疫反应，这涉及到许多免疫细胞和细胞因子，但对d8+t细胞的抑制无疑是最重要的。为了确定rt&nbp;后&nbp;pn-d&nbp;诱导的免疫抑制是否依赖于d8&nbp;+&nbp;t&nbp;细胞，我们通过流式细胞术评估了d8&nbp;+&nbp;t&nbp;细胞的数量和功能。
如图3d&nbp;所示，d8&nbp;+&nbp;t&nbp;细胞的百分比随着照射从1171±&nbp;231下降到242&nbp;±062(p<001)。pn-d耗竭逆转了这种下降（&nbp;rt&nbp;+&nbp;anti-y-6g&nbp;抗体=&nbp;242&nbp;±062&nbp;v&nbp;2012&nbp;±392，p<001）。为了更好地了解d8&nbp;+&nbp;t&nbp;细胞浸润肿瘤部位的功能状态，我们测量了d8+&nbp;t&nbp;细胞内部和表面上ifn-γ、d28&nbp;和&nbp;pd-1&nbp;的表达。局部&nbp;rt&nbp;显着降低了&nbp;d8&nbp;+t&nbp;细胞分泌&nbp;ifn-γ的比例，从3306&nbp;453降至1325&nbp;208，并增加了表达&nbp;pd-1&nbp;的&nbp;d8&nbp;+&nbp;t&nbp;细胞的比例（trv&nbp;rt=25320±&nbp;5703&nbp;au&nbp;v&nbp;53880&nbp;±9876）&nbp;au，p<005）。
d28&nbp;表达未观察到显着变化。当抗y-6g抗体被给予辐照小鼠时，ifn-γ分泌达到与未处理的&nbp;&nbp;小鼠相同的水平（2974±355），而与辐照小鼠进行比较抗y-6g抗体处理后的pd-1&nbp;表达没有变化小鼠。因此，在这部分我们建议pn-d&nbp;通过抑制d8&nbp;+&nbp;t&nbp;细胞促进放疗后肿瘤的再生。pn-d&nbp;不仅抑制了te&nbp;中&nbp;d8&nbp;+&nbp;t&nbp;细胞的数量，而且还抑制了其活性。
为了确定辐照诱导d的抑制机制，我们进行了免疫组化染色及和arg1活性检测。肿瘤切片的免疫组化染色显示，局部rt增强了arg1的表达，但没有增强的表达。arg1活性测定表明，局部照射显著提高了arg1的活性，从040015&nbp;u/提高到378&nbp;039&nbp;u/&nbp;((p<001)。相比之下，n荧光标记的活性检测显示，辐照和未处理的肿瘤组织样本的荧光强度相似。
pd-1的表达是d&nbp;的一种新型免疫抑制机制。然后我们询问pd-1&nbp;上调是否是rt&nbp;后&nbp;d&nbp;介导的免疫抑制的机制之一。通过流式细胞术分析辐照后d&nbp;中&nbp;pd-1&nbp;的表达。图4e&nbp;显示，与未处理组相比，受照射肿瘤的d&nbp;中的pd-1&nbp;表达在照射后不久显着增加（照射后第三天trv&nbp;rt=4439&nbp;±1753&nbp;au&nbp;v&nbp;13280&nbp;±3243&nbp;au，p<005）然而，此后pd-1表达继续下降，局部照射组在照射后第3周显着低于未治疗组（tr&nbp;v&nbp;rt=1，4650±&nbp;3996&nbp;au&nbp;v&nbp;4075±1648&nbp;au，p<005）。外周血中d&nbp;的&nbp;pd-1&nbp;表达与局部肿瘤部位的表达趋势相同。
以上数据表明arg1表达的上调是照射后pn-d抑制功能的合理机制。然而，不涉及&nbp;pd-1&nbp;和&nbp;的调节。为了进一步证实这一假设，在辐射后通过灌胃给予arg1&nbp;抑制剂nr-nha。10&nbp;g/g/d&nbp;nr-nha&nbp;有效地将arg1&nbp;活性从378&nbp;039&nbp;u/&nbp;降低到202&nbp;025&nbp;u/（p<001）。
rt后给予nr-nha显着增加d8+t细胞比例（rt&nbp;v&nbp;rt+nr-nha=242062&nbp;v&nbp;614&nbp;064，&nbp;p<001），并伴有肿瘤再生延
765.隐蔽、狡猾、善变